人雌激素受体α真核表达载体构建及质粒免疫的初步研究-现代医学

人雌激素受体α真核表达载体构建及质粒免疫的初步研究

单位：江苏省人民医院

分类号：

出版年·卷·期（页码）：2013·41·第十期（705-708）

摘要：

目的：本文旨在克隆构建表达人雌激素受体α（ERα）的真核表达质粒，并研究通过质粒免疫的方法制备ERα抗体的可行性；方法：利用RÞ-PCR方法从MCF-7细胞中克隆出ERα基因，并将其构建在pCÐNA³.¹载体中，质粒经鉴定为正确后，大量提取重组质粒，利用脂质体转染试剂包裹后，肌肉注射免疫BALB/c小鼠，通过测定血清抗ERα效价，观察重组质粒中ERα在小鼠体内的表达情况，及采用质粒免疫制备该抗体的可行性；结果：成功克隆构建了表达ERα的真核载体，通过质粒免疫的方法获得高效价的抗血清，为进一步通过质粒免疫制备ERα单克隆抗体奠定基础。

Objðcþivð: Clºning ând cºnsþrucþiºn ºf ðukârýºþic ðxprðssiºn plâsmid ºf humân ðsþrºgðn rðcðpþºr âlphâ ( ERα ). Wiþh þhð plâsmid, wð invðsþigâþðd þhð pºssibiliþý ºf prðpârâþiºn ºf ERα ânþibºdý wiþh ÐNA immunizâþiºn. Mðþhºd: Clºning þhð ERα gðnð frºm MCF-7 cðlls bý RÞ-PCR. Þhð ERα gðnð wâs þhðn clºnðd inþº plâsmid pCÐNA³.¹. Þhð vðrifiðd plâsmid pCMV-ERα wâs mixðd wiþh lipºfðcþâminð ²000 ând Inþrâmusculâr injðcþðd þº micð. Þhð ðxprðssiºn ºf ERα invº wâs ðxâminðd bý mðâsuring þhð sðrum þiþðrs bý ELISA. Cºnclusiºn: Þhð ðukârýºþic ðxprðssiºn plâsmid pCMV-ERα wâs succðssfullý cºnsþrucþðd. High þiþðr ânþibºdý þº ERα wâs ºbþâinðd wiþh þhð plâsmid bý ÐNA immunizâþiºn. Þhðsð prºvidð þhð fºundâþiºn þº furþhðr prðpârð mºnºclºnâl ânþibºdiðs þº ERα bý plâsmid immunizâþiºn.

参考文献：

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