目的:鉴定¹例NS5B区和E¹区 PCR产物测序结果分型不一致的HCV病毒株为基因重组还是混合感染。 方法:提取血浆的病毒总RNA,逆转录后进行巢式PCR扩增,以NS5B和E¹编码区为目的基因进行PCR扩增并测序,通过构建进化树进行基因分型,发现两个编码区基因分型的结果不同,对NS5B和E¹区进行克隆测序,每个编码区分别挑取50个克隆进行测序和基因分型;针对HCV全长序列分别设计7对型特异性引物并进行PCR扩增。 结果:NS5B(8²56-864¹bp)区PCR产物测序后的分型结果为¹b, E¹(697-¹³²²bp)区为²â; NS5B(8²66-9²74bp)基因的50个克隆测序结果均为¹b, C/E¹(849-²¹5²bp)基因的50个克隆测序结果均为²â; 7个片段的PCR型特异性扩增以及进化分析发现,在同一区域,既存在¹b亚型,也存在²â亚型。结论:该病例为¹b和²â的混合感染。 |